三叶青对迟发型变态反应的影响

三叶青对迟发型变态反应的影响

倪荷芳,夏卫军 ( 南京中医药大学科技处； 南京中医药大学第一临床医学院，江苏南京210046)

摘要：目的观察三叶青对迟发型变态反应的影响。方法 以2，4，6一三硝基氯苯诱导小鼠接触性皮炎及二甲苯诱导耳肿胀，测量诱导相和效应相小鼠的耳廓厚度；以绵羊红细胞诱导小鼠足肿胀，测量诱导相和效应相小鼠足肿厚度。结果三叶青可抑制2，4，6一三硝基氯苯及绵羊红细胞诱导相肿胀反应，对二甲苯所致的耳廓肿胀无抑制作用。结论 三叶青主要作用于T淋巴细胞的活化、增殖、分化及效应细胞形成的过程等，而对抗原特异性T细胞的效应过程及其以后的炎症过程影响较小。

关键词：三叶青；迟发型变态反应；抗炎中图号：R282．710．5 文献标识码：A 文章编号：1000—5005(2007)04—0241—03
三叶青的基源为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤Tetrastign~hem sleyanum Dielset Gilg。三叶青以块根或全草入药，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能，用于治疗各种火毒炽盛之内、外科疾病之高热惊厥、肺炎、哮喘、肝炎、风湿、月经不调、咽痛、瘰疬等症，具有很好的疗效。已有报道指出三叶青提取物有抗病毒作用_1 和明显的消炎镇痛[ ， ]及保肝作用[ 。但其作用机理尚不明了。本研究从免疫学角度初步探讨其抗炎解毒的机理。

1 实验材料
1．1 药品与试剂
三叶青(Radix Tetrastigmae)为葡萄科植物三叶崖爬藤(Tetrastign~hem$leyartl~ln Dielset Gilg)的干燥块根。地塞米松磷酸钠注射液(dexametha—SOile，江苏省江阴制药厂)；2，4，6一三硝基氯苯(picryl chloride，PC1，Nacalai tesque Inc，Kyoto，Japan)；橄榄油(olive oil，上海化学试剂站分装，上海)；绵羊红细胞(sheep red blood cell，SRBC，江苏省南京江宁卫生防疫站)；二甲苯(xylene．江苏省南京化学试剂厂)；液晶显示螺旋测微器(0．001mill，Mitutoyo Co．，Tokyo，Japan)。
1．2 实验动物
昆明种雌性小鼠，体质量18—22 g，由上海斯莱克实验动物责任有限公司提供，生产许可证：SCXK(沪)2003—0003；南京中医药大学实验动物使用许可证：SCXK(苏)2002—0053。

2 方法与结果
2．1 方法
2．1．1 2，4，6一三硝基氯苯诱导的小鼠接触性皮炎(PCl—cs)E ]
小鼠剃去腹毛，涂1％ PC1的无水乙醇溶液100 致敏，5 d后用1％PC1的橄榄油溶液30涂于右耳两面进行攻击，18 h后用螺旋测微器测量左右两耳厚度，将两耳厚度差作为DTH反应的强度。
2．1．2 绵羊红细胞诱导的足肿胀(SRBC—DTH)L6
在无菌的条件下将SRBC用生理盐水洗3次，洗涤完毕后配成2．5×108／mL的生理盐水溶液，在小鼠左后足趾皮下注射该溶液40 致敏，5 d后在右后足趾皮下注射浓度为2．5×109／mESRBC的生理盐水溶液40 进行攻击，22 h后用螺旋测微器测两足趾厚度，将厚度差作为DTH反应的强度。
2．1．3 小鼠免疫器官重量及脏器指数的测定
小鼠末次给药后2 h断头处死，取脾脏及胸腺称湿质量，以器官的质量量除以小鼠的体质量作为每种器官的脏器指数。
2．1．4 二甲苯诱导的耳肿胀
连续6 d给小鼠灌服三叶青的醇提物或肌注地塞米松，最后一次给药后2 h，在小鼠右耳涂30二甲苯致炎，2 h后测两耳的厚度，将其厚度差作为炎症反应的强度。
2．1．5 统计分析
所有数据用 ±S表示，统计采用方差分析，对方差分析有显著差异者，2组之间用Student’St-test，2组以上用Dunnett’s test(q检验法)比较组间差异。
2．2 结果
2．2．1 三叶青对PC1．CS诱导相和效应相的影响
造小鼠PC1．CS模型，从小鼠致敏当天起连续6 d经口分别给予生药2、4、8 g／kg(诱导相给药)，或者于小鼠攻击后0 h、5 h及10 h连续3次经口给予三叶青生药2、4、8 g／kg(效应相给药)，对照组经口给予蒸馏水，阳性对照组肌注地塞米松l0mg／kg。三叶青于诱导相给药，4及8 g／kg组显著抑制了耳肿胀，而各剂量组于效应相给药，则无明显影响。阳性药地塞米松不论诱导相还是效应相均显著地抑制了耳肿胀。结果见表1。
2．2．2 三叶青对PC1．CS模型小鼠免疫器官质量的影响
取诱导相给予三叶青生药2、4、8 g／kg PC1．CS模型小鼠，6 d后测定小鼠脾脏及胸腺的脏器指数。地塞米松对免疫器官有极显著的抑制作用，特别是胸腺全部萎缩；而三叶青给药组的脾脏及胸腺指数与对照组相比则无明显差异。结果见表2。
2．2．3 三叶青对SRBC．DTH诱导相和效应相的影响
造小鼠SRBC．DTH模型，从小鼠致敏当天起连续6 d经口给予三叶青生药2、4、8 g／kg(诱导相给药)，或者于小鼠攻击后0 h、5 h及10 h连续3次经口给予三叶青生药2、4、8 g／kg(效应相给药)，对照组经口给予蒸馏水，阳性对照组肌注地塞米松10 mg／kg。结果表明，三叶青于诱导相给药，4及8 g／kg组显著抑制了足肿胀，而各剂量组于效应相给药，则无明显影响。阳性药地塞米松不论诱导相还是效应相均显著地抑制了足肿胀。
结果见表3。
2．2．4 三叶青对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
小鼠连续6 d经口给予三叶青生药2、4、8 g／kg，同时设模型组及阳性药地塞米松10 mg／kg组，末次给药后2 h致炎。三叶青对二甲苯诱导的耳肿胀均无明显影响(P>0．05)，阳性药地塞米松则强烈地抑制了小鼠的耳廓肿胀(P<0．01)。结果见表4。

3 讨论
迟发型变态反应(delayed．type hypersensitivity，DTH)是一种典型的由辅助性T细胞(Th)介导的细胞免疫反应，主要表现为抗原攻击局部出现以单核细胞及淋巴细胞浸润为主要特征的炎症反应。它通常可划分为2个时相：抗原攻击之前称为诱导相，包括T淋巴细胞的活化、增殖、分化、效应细胞形成的过程等；抗原攻击之后称为效应相包括抗原特异性T细胞向炎症局部移动浸润并产生多种细胞因子发挥效应功能及其以后的炎症过程等。
小鼠接触性皮炎(PC1．cs)是一种典型的DTH反应，本研究发现，三叶青对于PC1一CS诱导相给药，三叶青均可显著减轻耳肿胀。阳性药地塞米松不论是诱导相还是效应相均极显著地抑制了耳肿胀，但与此同时其对免疫器官也显示出很强的毒性，表现为极显著地降低胸腺和脾脏指数，并导致绝大部分动物的胸腺萎缩，而三叶青对胸腺和脾脏指数无明显影响。PC1．CS是一种半抗原所致的DTH反应，而SRBC．DTH则是一种颗粒细胞抗原引起的DTH反应，我们的结果表明，对于2种不同原因导致的DTH反应，三叶青对于诱导相给药均能显著抑制。这一结果提示，三叶青主要用于T淋巴细胞的活化、增殖、分化及效应细胞成的过程等，而对抗原特异性T细胞的效应过及其以后的炎症过程影响较小。

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(编辑：李伟东)